单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知，然而其高昂的每样本成本和技术复杂性，限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”，但现有的方法往往受限于抗原种类活性朋友、寡核苷酸修饰语投入激昂或进行步骤较为复杂。近日，南方海洋科学与工程广东实验室（广州）的陈凯教受技术团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究，提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略，为我们提供了一个低生产成本、跨种类、全工作平台兼容的全新解决方案。

中文核心期刊详细介绍

Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国内 专业的院隐性基因基因性与阴茎发育植物学学的理论研究院所和国内 隐性基因基因性学着主办单位的國際科研杂志，努力于简讯人生专业的和医学理论研究隐性基因基因性学这个的区域的原创基地性的理论研究优秀成果。JGG 2023年度直接影响系数7.1，Scopus科研杂志评价语指标英文CiteScore 9.9，排名第JCR 2023年度GENETICS & HEREDITY这个的区域Q1区(Top 10%)，BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY这个的区域Q1区，排名第国内 专业的院杂志磁盘分区植物学学商品类别1区(Top杂志)，隐性基因基因性学和生化学与碳原子植物学学小类双1区。

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一些是HEATag

巧用的“二合为一体”方案

HEATag是由凝集素和HUH内切酶包括的溶合蛋白质

「固定器」控制器 - 凝集素

能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化突显（如GlcNAc和Neu5Ac）。

「接器」模块图片 - HUH内切酶

可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA（ssDNA）数据库索引长条码开展共价相连。

“1+1>2”的效用：将两者融合，得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上，又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样例标签与可追溯。

Fig1: HEATag多方面标记图片作用举手图

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进阶篇测试

HEATag现在有可以打？

就可以在不同于必备条件下，变现乳期食草动物细胞系系系单细胞系系混样测序

实验室里的设计再精妙，也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究分析的团队为 HEATag 设制了多轮 “有压力试验”，从内部系到内部核，从恒温的到常温，从新鲜范本到确定范本，全坐向证实它的固定性分析和靠谱性。

第二轮软件测试对哺乳期猎物神经元系：探析人士进行了来源于人、鼠、仓鼠这几个植物植物种类的六种神经元（HEK293T、K562、MEF、CHO），在制冷使用 HEATag 箭头后混合型测序。终结收回的 11447 个神经元中，85.66% 都能经由 HEATag 长条型码更准配备到原植物植物种类，样品间重叠弄脏不多，UMAP 聚类讲解讲解更多的是就直接证明信，HEATag 长条型码与植物植物种类特女性朋友基因遗传组表现极高不一。 然后，测量经济因素进步骤升级成：科学研究者试过在 4℃下记号新的感组织、在制冷下记号甲醇确定住组织，甚至于能直接记号组织核。成果从未醒目：那些经济因素下，子样表标鉴与外来物种有关系信息均有非常好的有关系性，切分最有效率超 95%。纵然甲醇确定住会引发少少的转录本交叠水污染，组织核制取就会极富 RNA 掉失，组织类的批注成果从未与新的感子样表确保不一样，表明 HEATag 能记号各种不同办理经济因素下的科学实验子样表。

Fig2: HEATag 可在不一状况下进行单受损细胞转录组混样剖析

也可以标签蒲乳期节肢甲壳动物和浅海无脊梁骨节肢甲壳动物的原代上皮细胞

只要说细胞核系系测试软件是 “条件题”，那组识子样例即使 “增加题”， 哪些子样例必然因细胞核系性质繁多、场景认知性特俗，变成标出能力的 “思路”，而 HEATag 恰恰恰在哪些 “思路” 上能够 了胜机。

研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸组织性，这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型，对标记一致性的要求极高。实验中，两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序，最终获得的 14663 个细胞既能被明确分清，整个主要的内部品类的聚类算法数据都清淅可辨。

更令人惊喜的是HEATag对深海怪物的兼容性测试性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞（如海月水母、大西洋海刺水母）。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序，最终回收的 6452 个细胞中，HEATag 长形码与植物物种转录组具有着较高不符性，没得经常出现因高盐周围环境造成的的 “符号不起作用”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示，HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。

Fig3: HEATag 可改变乳期食草动物组织开展子样本很多 scRNA-seq 研究

Fig4: HEATag可变现丰富海洋生物无脊椎神经動物几吨 scRNA-seq 分享

HEATag与细胞膜的紧密结合都不会导致转录组的同质性改进

对样本标记技术来说，“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序，对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示，标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异，捕获的基因数量基本持平，UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似，转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果，还是不同细胞类型的基因回收数量，两组都几乎一致，没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着，HEATag在搞定标注责任的另外，没对险遭的转录类物质析带来抑制，要确保了探析参数的实际性。

Fig5: HEATag没有关系样版的 RNA 传达模式切换

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未来的可期

HEATag 能为单癌细胞研究方案带给些什么？

HEATag 的社会价值，远不已于 “缓解符号情况”，它的具备灵亲水性高性和普遍性，目前在为单细胞核设计打开网页更高已经性

从软件应用情况方面看

HEATag 能所覆盖从 “简短更讲解”（如癌策划 与顺利策划 、口服药物正确处理与参考）到 “大投资范围研发”（如策划 组织图谱编写、mtk量淘汰）的全位置需要量。逐渐 PIP-seq、Stereo-cell 等最新科技可拓张水平的快速发展，HEATag 还能进步提升自己单组织研发的通量，推助成果转化拜谱生物组织开展大些投资范围的工程项目。

从跨行业领域潜质来谈

HEATag 除了适用人群于转录组学，还能与表观DNA组学、核脂肪酸组学、空间组学等技巧结合起来，依据定制开发目录和寡核苷酸编码序列，HEATag 可以枯燥营造有差异 的组学程序，不干扰信息采集层次。直接，特征提取HEATag还可以成长 单细胞核糖组学调查技巧。

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企业合作的动态

拜谱生物体与陈凯讲师已达成阶段性合作协议意愿

比较适合注意的是，在 HEATag 能力展示出极大采用潜质的原型下，拜谱怪物已与我国南部海域能进行实验操作与施工江苏进行微生物制品工程实验操作室（佛山）陈凯教导达到目标进行协同有意向的客户。夫妻之间的工作计划致力于 HEATag 能力的文化产业化发展正式出台、教育科研管理管理转变等方向上开展深层次协同，积极推动某一成本更低价、跨鱼类的单人体体细胞系记号能力快一点采用于真正教育科研管理管理场所，为大多进行微生物制品工程实验操作室带来高效化、实惠的单人体体细胞系教育科研设备，力助教育科研管理管理的工小说作者在人体体细胞系怪物学、海域能怪物学、妇科疾病策略等行业争取大多攻克